【脉铂医药】MedBio|MED18309|Rhod-FF AM|技术资料

1、Rhod-FF AM相关介绍：

Rhod-FF是一种荧光化合物，其激发峰在553 nm，发射峰在577 nm。可以使用561 nm激光器和585/20 nm带通滤波器进行激励，这种配置可以在BD特殊顺序LSRFortessa™细胞分析仪中找到。Rhod-FF的光谱类似于亚铁酸盐次氯酸盐传感器、亚硝酸盐橙、Cy3 (Cyanine-3)、MMP红和Rhod-2。Rhod-FF AM是荧光钙指示剂rhod-FF的可渗透细胞的乙酰氧基甲基酯。当rhod-FF AM进入细胞时，它会被细胞内酯酶水解以产生rhod-FF。Rhod-FF是细胞不渗透钙的指示剂rhod-2的二氟化类似物它对钙的亲和力很低（Kd = 320 µM）。Rhod-FF, AM产品的光谱学相关参数为Ex=553/ Em=577；对应分子量大小为1145.9。

属于以下相关类别:钙指示剂、细胞内离子、生理探针。

2、Rhod-FF AM特点：

Rhod-FF, AM特点:

•结合Ca2+时荧光强度增加:>100倍

•Ca2+在Mg2+缺失时，在缓冲液中的Kd值:~19µM

•与Ca2+结合后荧光增强，且波长变化不大

3、Rhod-FF AM 相关资料：

众所周知，钙的测定对于许多生物学研究至关重要。

(1)钙:在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针，使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-FF AM具有细胞渗透性，并在细胞中酯酶水解后生成Rhod-FF。Rhod-FF对Ca2 +具有较低的结合亲和力，适用于10至200 uM的Ca2+测量。像母体Rhod-2指示剂一样，Rhod-FF在不存在二价阳离子的情况下基本上是无荧光的，但在结合Ca2+时显示出强的荧光增强，没有光谱偏移。

(2)荧光单波长钙指示剂:最常见的可见光激发的钙离子探针有Fluo-8 ®，的Fluo-4，Fluo- 3，RHOD-2和RHOD-4。Fluo- 8®指示剂广泛用于流式细胞术，共聚焦激光扫描显微镜以及高通量筛选GPCR靶标。FLUO-8 ®是基本上无荧光的，除非与Ca2+结合至，此时量子产率为〜0.15以及在饱和Ca2+存在条件下Kd为的390nm。Cal-520®是迄今为止最佳的488 nm处激发绿色荧光钙离子指示剂，具有显著改善的信号/背景比和细胞内保留的特征。长波长的Rhod-4™，Cal-590™和Cal-630™是绿色荧光Fluo-8®，Fluo-4和Fluo-3的Ca 2+指示剂，可用于存在高水平的自体荧光的细胞和组织中进行钙定量。Rhod-5N对Ca 2+的结合亲和力低于任何其他基于BAPTA的指示剂（Kd =〜320 µM），适用于10 µM至1 mM范围内的Ca 2+测量。像母体Rhod-2指示剂一样，Rhod-5N在不存在二价阳离子的情况下基本上是无荧光的，并且在结合Ca 2+时显示出强的荧光增强，没有光谱偏移。所有Fluo，Cal和Rhod指示剂均可作为不渗透细胞的钾盐或可渗透细胞的AM酯使用。低亲和力钙指示剂对于研究含高浓度钙的隔室（例如内质网）特别有用，其中高亲和力染料对腔波动不敏感。Rhod-FF的激发/发射最大值分别约为552和580 nm。

(3)离子探针:离子探针提供了一种将离子通道激活与细胞内离子浓度的后续变化测定相关的方法。用这些类型的探针测量的离子丰度变化同时也反映了细胞的膜电位的变化，好用的离子探针，可有效地测量离子。

钙可作为多种细胞中的通用第二信使，Ca 2+调节所有类型细胞的许多功能，因此钙测量对于各种生物学研究至关重要。在1980年代，Tsien及其同事生产了各种荧光指示剂。其中Indo-1，Fura-2，Fluo-3和Rhod-2是测量Ca 2+浓度的最有价值的染料。近年来，我们陆续推出了更优秀的钙离子探针：Fluo-8 ®，Cal-520 ® 和Calbryte™520，这些为实现高通量监测钙浓度，筛选GPCR和钙离子通道药物筛选提供了有力的工具。

比值型荧光探针进行定量，减少了染料负载导致的指示不均匀，不良的染料保留和光漂白的影响。自1985年Tsien及其合作者引入比例计量指标以来，无数科学论文都引用了比例指标，这些指标有助于研究钙在细胞调节中的作用（Grynkiewicz等人1985）。

水母发光蛋白复合物由22,000Da的载水母发光蛋白，分子氧和发光体腔肠素组成。当三个Ca 2+离子与该络合物结合时，腔肠素被氧化为腔肠酰胺，并伴随释放出二氧化碳和蓝光。水母发光蛋白的生物发光对Ca 2+浓度的依赖性使得可以在0.1 µM至> 100 µM的检测范围内测量Ca 2+浓度。与荧光Ca 2+指示剂不同，检测Ca 2+结合的水母发光蛋白，无需照亮样品，从而消除了自发荧光的干扰。

4、Rhod-FF AM贮存方法：

对于 Rhod-FF, AM 产品，我们推荐使用常温进行运输。在您收到货物后，我们建议在低于-15℃温度下冷冻保存，要求储存环境干燥并避免光照。

5、Rhod-FF AM参考文献：

Activation of mitochondrial transient receptor potential vanilloid 1 channel contributes to microglial migration
Authors: Miyake, Takahito and Shirakawa, Hisashi and Nakagawa, Takayuki and Kaneko, Shuji
Journal: Glia (2015): 1870--1882
ER stress in human hepatic cells treated with Efavirenz: mitochondria again
Authors: Apostolova, Nadezda and Gomez-Sucerquia, Leysa J and Alegre, Fern and o and Funes, Haryes A and Victor, Victor M and Barrachina, Maria D and Blas-Garcia, Ana and Esplugues, Juan V
Journal: Journal of hepatology (2013): 780--789
Ionic calcium determination in skim milk with molecular probes and front-face fluorescence spectroscopy: simple linear regression
Authors: Gangidi RR, Metzger LE.
Journal: J Dairy Sci (2006): 4105
Measurement of limestone biodeterioration using the Ca2+ binding fluorochrome Rhod-5N
Authors: McNamara CJ, Perry TDt, Bearce K, Hern and ez-Duque G, Mitchell R.
Journal: J Microbiol Methods (2005): 245

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